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电泳操作过程中有哪些注意事项
Thu Jul 20 00:00:00 CST 2023昀冠科学商城新闻编辑
1.DNA电泳与溴化乙锭
“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂，具有高致癌性，会在60～70 cc蒸发，所以在学生实验中要特别注意其安全使用，严禁随便丢弃。在实验中使用及实验结束后处理应注意以下事项。
（1）使用中注意事项
实验室涉及到EB的操作应统一固定在实验室的某一角落，称量固体时要带面罩和手套，使用含有EB的溶液务必带上手套。同时不要在胶太热的时候加EB，以防止因蒸发被吸入。接触到EB的玻璃器皿应集中放置并专门使用，污染到EB的枪头、抹布、手套及EB染色跑完的胶，回收至棕色的玻璃瓶中，定期进行焚烧处理旧。桌面或物体表面污染到EB时，可用活性碳进行处理。
（2）废EB溶液处理
A：EB浓溶液（浓度大于0.5mg/mI）的净化处理
先将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/mI，加人1倍体积的5％次高锰酸钾，小心混匀后再加1倍体积的2.5 moL/L盐酸。小心混匀，于室温放置数小时；加入l倍体积的2.5 mol/L氢氧化钠，小心混匀后可丢弃该溶液，统一处理。
B：EB稀溶液(浓度小于0.5mg/mI)的净化处理
按1 mg/mL的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1 h；用滤纸过滤溶液，丢弃滤液并将活性碳与滤纸密封后丢弃，统一处理。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳与有毒、有害物质
聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物化学实验中是常用的实验手段，涉及到蛋白质分离纯化及鉴定、蛋白质分子量及等电点测定的实验都会使用到该电泳方法，如“聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质”、“SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量”、“聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点”等基础实验。在聚丙烯酰胺凝胶制备过程中用到以下有毒、有害物质：
（1）丙烯酰胺
丙烯酰胺具有很强的神经毒性，同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化。实验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物。丙烯酰胺可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体，且累积毒性，不容易排毒。因此，称量固体丙烯酰胺粉末和处理它们的溶液时必须戴手套和口罩。当丙烯酰胺聚合为聚丙烯酰胺凝胶时则为无毒的，但操作时仍要小心，凝胶内可能有少量未聚合的丙烯酰胺。
（2）甲叉双丙烯酰胺
甲叉双丙烯酰胺是丙烯酰胺形成凝胶的交联剂，因有取代基丙烯酰胺，因此具有一定的毒性，能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。称量固体粉末和处理它们的溶液时需戴手套和口罩，应避免与人体长时间直接接触，误碰触时应用清水洗净。
（3）TEMED
TEMED是形成凝胶反应所用的加速剂，也具有强神经毒性，应防止误吸，操作时快速，存放时密封。
（4）过硫酸铵
过硫酸铵是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺进行化学聚合的引发剂，对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸人可致命。操作时需戴合适的手套、安全眼镜和面罩，始终在通风橱里操作，操作完后彻底洗手。
（5）十二烷基硫酸钠(SDS)
SDS是种阴离子表面活性剂，与蛋白形成复合物，用于测定蛋白质分子量。SDS有毒，是一种刺激物，能对眼睛造成严重损伤，可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。称量及配溶液时不要吸人其粉末，需戴合适的手套、面罩和护目镜。
（6）巯基乙醇
它在测定蛋白质分子量时用于处理样品，吸入、摄人或经皮肤吸收后会中毒。其中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷，甚至死亡；对眼、皮肤有强烈刺激性；对环境有危害；对水体可造成污染。应在通风橱里操作，佩戴面罩，戴乳胶手套。
3. RNA提取与有毒、有害溶剂
“动物肝脏RNA的制备和纯度测定”是生物化学实验课中必开的基础实验，RNA的提取过程需要用到溶剂去除蛋白质，这些溶剂对人体具有一定的毒性。
（1）氯仿
它对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用，是一种致癌剂，可损害肝和肾。它也易挥发，应避免吸入挥发的气体；操作时需戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。
（2）异戊醇
它被吸人、口服或经皮肤吸收有麻醉作用。其蒸气或雾对眼睛、皮肤、粘膜和呼吸道有刺激作用，可引起神经系统功能紊乱，长时间接触有麻醉作用。操作时应戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。
（3）含水酚液
它含有苯酚，对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用，可抑制中枢神经或损害肝、肾功能。吸人高浓度苯酚蒸气可致头痛、头晕、乏力、视物模糊、肺水肿等疾病。其慢性中毒可引起头痛、头晕、咳嗽、恶心、呕吐。称量苯酚时应佩戴防尘口罩，操作溶液时戴合适的手套和安全眼镜，并始终在化学通风橱里进行。它一旦接触皮肤，立即用大量流动清水冲洗，至少15 min。实验结束后产生的含酚废液可加入次氯酸钠或漂白粉煮一下，使酚分解为二氧化碳和水，再进行排放。
有机溶剂及实验废液等实验完成后应倒人盛放废液的容器中，然后统一回收，集中处理。
4. 其它有毒、有害物质
“氨基酸的分离与鉴定”也是生物化学中必开的基础实验，茚三酮是氨基酸的显色剂，一般是配成溶液在喷雾器中喷雾使用。茚三酮经消化道摄入和吸人都有害，对眼、呼吸系统和皮肤有刺激作用；皮肤反复接触能引起皮肤过敏。使用中应避免吸入雾滴或蒸气；避免与眼接触；使用橡胶或塑料手套、面罩以及护目镜。
沪公网安备31011502401370
